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ELISA大致分为五种类型：直接法、间接法、竞争法、夹心法、捕获包被法。在
ELISA
试剂盒中用得比较多的是双凯发k8娱乐官网入口夹心法、竞争法和间接法。那么接下来酶标小编就先和你们谈谈双抗夹心法吧。
双凯发k8娱乐官网入口夹心法中抗原的2个不同的抗原表位被两个凯发k8娱乐官网入口
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捕捉凯发k8娱乐官网入口和检测凯发k8娱乐官网入口，分别结合。捕捉凯发k8娱乐官网入口固定于载体即酶标板上，检测凯发k8娱乐官网入口通过结合抗原进行显色分析。应用于双凯发k8娱乐官网入口夹心法检测的捕捉凯发k8娱乐官网入口通常是单抗，偶尔有用多抗做为捕捉凯发k8娱乐官网入口的情况，但很少见，因为以多抗作为捕捉凯发k8娱乐官网入口容易出现交叉反应而降低特异性。检测凯发k8娱乐官网入口通常为多抗，在科研试剂盒中经常用到生物素标记的山羊多抗，再让生物素标记的多抗与
HRP
标记的亲和素或者链霉亲和素结合，然后再加
HRP
也就是辣根过氧化物酶的底物，通常是
TMB
反应显色，这种方法是在传统的
HRP
酶标记凯发k8娱乐官网入口的双凯发k8娱乐官网入口夹心法
ELISA
中引入了生物素
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亲和素放大系统。
不过也有用单抗做检测凯发k8娱乐官网入口的情况，尤其是在科研中。双凯发k8娱乐官网入口夹心法具有高灵敏度、高专一性的优势，但该法只适用于有多个结合位点的抗原检测，主要用于检测各种大分子抗原
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例如在医学检测中测定
HBsAg
、
HBeAg
、
AFP
等疾病相关的，以及在科研中检测细胞因子等。由于双凯发k8娱乐官网入口夹心法特异性高，在检测过程中有时会将样本和酶标凯发k8娱乐官网入口同时加入进行反应，称为双凯发k8娱乐官网入口夹心一步法，因为操作时间短，在生产中有很大优势。但双凯发k8娱乐官网入口夹心一步法要特别注意
ELISA
中的钩状效应
(hook ffect)
，因为此时如果样本中抗原含量过高会导致其与固相凯发k8娱乐官网入口和酶标凯发k8娱乐官网入口均有结合而无法形成
“
夹心复合物
”
，此时测出的结果将低于实际含量甚至是阴性结果。因此，如果使用双凯发k8娱乐官网入口夹心一步法测定样本中抗原含量时要注意测量的线性范围，另外使用高亲和力的单抗也可削弱钩状效应。
双抗原夹心法中抗原被包被于固相，检测样本中的凯发k8娱乐官网入口结合于抗原后，使用酶标的抗原进行结合及后续反应，可以用来测定样本中的凯发k8娱乐官网入口。双抗原夹心法的关键在于酶标抗原的制备，需要根据抗原结构进行设计，在医学检验上测定抗HBsAg凯发k8娱乐官网入口采用的就是此法，检测时被测样本不需要稀释即可直接进行测定。
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